农业生物技术学报

作者：潘力, 马秀丽, 黄中利, 李桂明, 唐亮, 于可响, 林树乾

单位：1 山东省农业科学院 家禽研究所,济南 250023; 2 山东农业大学 动物科技学院,泰安 271018

关键词：新型鸭呼肠孤病毒,绿原酸,抗病毒,qPCR,

基金：山东省自然科学基金(ZR2019MC022); 国家重点研发计划(2017YFC1702700); 济南自主培养创新团队项目(2019GXRC025); 中央引导地方科技发展专项资金(鲁财教指[2017]77号); 山东省农业科学院学科团队建设项目(CXGC2018E11); 山东省现代农业产业技术体系家禽首席岗位项目(SDAIT-13-011-01); 山东省农业科学院农业科技创新工程项目(CXGC2016A10); 山东省农业科学院科技创新工程学科团队专项经费(CXGC2018E11); 山

由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)引起的NDRV病是困扰我国养鸭业的主要疾病之一。绿原酸(chlorogenic acid, CHA)作为许多中药的主要成分,在抗病毒方面发挥着重要作用。本研究拟明确CHA在NDRV感染幼仓鼠(Mesocricetus auratus)肾细胞系BHK-21不同阶段的抗病毒作用效果,为CHA抗NDRV的临床治疗提供参考依据。首先根据NDRV的S3基因序列(GenBank No. KJ879932)设计引物,建立NDRV实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR, qPCR)检测方法;然后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒测定CHA的细胞毒性,确定CHA在BHK-21细胞上的最大安全浓度;最后进行抗病毒试验,组Ⅰ向BHK-21细胞接种病毒NDRV,然后加入不同浓度的CHA,定期收集细胞冻融液;组Ⅱ的病毒吸附方式与组Ⅰ相同,用药前病毒NDRV先在BHK-21细胞上增殖10 h,定量检测增殖10 h后的病毒载量作为基值;以病毒增殖10 h为实验起始点,分别加入不同浓度的CHA,后续流程与组Ⅰ相同;以上两组均设置阴性和阳性对照。定期观察细胞病变,并将收集的样品进行NDRV的qPCR检测。结果显示,本研究建立的用于NDRV检测的qPCR方法最低检测限为92.5拷贝/μL;CHA在BHK-21细胞上的最大安全浓度为128 μg/mL;CHA能在体外抑制NDRV增殖,存在明显的剂量效应关系。本研究可为NDRV的相关机制研究和实际应用提供基础资料。

来源：2020年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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