农业生物技术学报

作者：李卓然, 宋子昂, 李占鸿, 杨振兴, 杨恒, 廖德芳

单位：1 云南省畜牧兽医科学院 云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,昆明 650224; 2 云南农业大学 动物医学院,昆明 650224

关键词：蓝舌病病毒(BTV),BTV-25、-26和-27型,基因组节段2 (Seg-2),血清型特异性一步法qRT-PCR,

基金：国家自然科学基金(31760744; 31802177); 国家重点研发计划(2017YFC1200505); 云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(2017HB055)

蓝舌病病毒(Bluetongue virus, BTV)是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒,自2008年以来世界范围相继发现了BTV-25、-26和-27型3种新血清型BTV,我国也面临新血清型BTV侵入的威胁。本研究根据BTV-25、-26和-27型毒株的基因组节段2 (genomic segment 2, Seg-2)序列,合成长度约500 bp的待检靶基因DNA序列,体外转录为单链RNA (single strand RNA, ssRNA)作为参考核酸,设计血清型特异性扩增引物与TaqMan探针,建立BTV-25、-26和-27血清型特异性一步法qRT-PCR。结果表明：成功获取了BTV-25、-26和-27型参考核酸,建立的BTV-25、-26和-27型一步法qRT-PCR检测方法灵敏度高,对BTV-25、-26和-27型ssRNA检测灵敏度分别为4.43×101、5.61×101和4.88×101拷贝/μL;重复性好,组内和组间变异系数在0.48%至1.79%之间;特异性强,与BTV其他血清型毒株、流行性出血病病毒、阿卡斑病毒和非洲马瘟灭活疫苗毒株之间无交叉反应。采集自南方地区的120份BTV核酸阳性血液样本中,未检测到BTV-25、-26和-27型病毒核酸。本研究为我国开展BTV-25、-26和-27型的监测提供了有效的技术手段。

来源：2020年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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