农业生物技术学报

作者：刘洁, 高风英, 陈刚, 卢迈新, 曹建萌, 刘志刚, 王淼, 韩雪晴

单位：1 广东海洋大学 水产学院,湛江 524025; 2 中国水产科学研究院 珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广州 510380; 3 上海海洋大学 水产学院 上海 201306

关键词：尼罗罗非鱼,β干扰素诱导型含TIR结构域的接头分子基因(TRIF),基因克隆,表达分析,亚细胞定位,

基金：现代农业产业技术体系专项资金(CARS-46); 国家重点研发计划(2018YFD0900302)

β干扰素诱导型含TIR结构域的接头分子(TIR domain-containing adaptor inducing interferon-β, TRIF)介导Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)信号传导途径中的下游信号传导,在宿主固有免疫应答中具有重要作用。为探究TRIF是否参与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)抗病免疫反应,本研究通过反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)和分段扩增获得TRIF基因的cDNA (GenBank No. MT199561),并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR (real time quantitative PCR, qRT-PCR)技术检测该基因在健康个体及无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染、脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)和聚肌胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid, Poly I:C)刺激后的组织表达;进一步构建重组真核表达载体,分析TRIF在人 (Homo sapiens)胚肾293T细胞的定位及对核因子κ B (nuclear factor-κ B, NF-κB)的激活作用。结果显示,尼罗罗非鱼TRIF cDNA全长3 135 bp,其ORF为1 653 bp,编码550个氨基酸。其蛋白质分子包含保守的Toll/IL-1受体(Toll/interleukin-1 receptor, TIR)结构域。系统进化树中,尼罗罗非鱼TRIF与其他鱼类成簇后再与斑马鱼(Danio rerio)和哺乳动物聚成一支。组织表达分析表明,TRIF在尼罗罗非鱼11个组织/器官中均有表达,在肌肉和血液中表达量最高。人工感染无乳链球菌可引起TRIF基因在脾脏和肾脏中的上调表达,均在感染后1 d达到最大值;LPS刺激后,TRIF在肝脏和脾脏中的表达呈上调趋势,在肠和肾脏中呈下调趋势;Poly I:C刺激后,TRIF在肠和肝脏中上调表达,在肾脏中下调表达。亚细胞定位和双荧光素酶报告分析显示,TRIF在293T细胞中定位于细胞质,可增强NF-κB活性。上述结果表明,TRIF基因在尼罗罗非鱼的免疫应答中可能具有重要作用,本研究可为进一步探讨硬骨鱼类TRIF基因在免疫进化中的功能提供参考依据。

来源：2020年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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