农业生物技术学报

作者：谭红黎, 桂亚萍, 李梅珍, 黄鑫, 秦文娟, 查丽莎, 陈芳芳

单位：安徽农业大学 动物分子与应用免疫创新团队,合肥 230036

关键词：Rab5a,Ii转运,细胞内吞体,细胞器定位,

基金：国家自然科学基金(31572496); 国家重点研发计划专项经费(2018YFD0502003)

Rab5a是胞内转运蛋白,而恒定链(invariant chain, Ii)则是协助主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC) Ⅱ分子装配成熟以及递呈抗原肽的免疫分子。长期以来,Ii的胞内途径机制并不清楚。本研究旨在探明鸡(Gallus gallus) Rab5a的结构特征及参与Ii在胞内转运中的作用。首先,用自行设计的引物克隆鸡Rab5a基因(GenBank No. XM_015281490),构建含鸡cIi、cIi突变体(IiD81-87aa和IiD91-99aa)的重组表达载体;其次,应用软件比对鸡和小鼠(Mus musculus) Rab5a蛋白质结构。最后,分别将Rab5a和cIi转染小鼠树突状细胞系DC2.4细胞,应用免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察鸡Rab5a与cIi和cIiD81-87aa和cIiD91-99aa在真核细胞内的定位与共定位。应用GST pull-down和Western blot检测鸡Rab5a和Ii蛋白分子间的相互作用。结果表明,克隆获得的鸡Rab5a基因与预期大小一致,为648 bp。分子结构分析表明,鸡与小鼠的Rab5a高度相似,同源性高达95.4%。同源建模分析结果显示,鸡与小鼠Rab5a均含有5个α螺旋和6个β折叠区,表明哺乳类和禽类Rab5a是同源的。激光共聚焦显微镜观察表明,鸡Rab5a和Ii均定位于细胞的早期内吞体,而突变体IiD81-87aa和IiD91-99aa却不能定位于早期内吞体。GST pull-down和Western blot结果显示鸡Rab5a能够结合Ii分子。综上所述,鸡Rab5a与Ii在早期内吞体的共定位和互相结合提示,Rab5a参与Ii在细胞内的转运。本结果为进一步研究其机理提供了新依据。

来源：2020年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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