农业生物技术学报

作者：杨清华, 董德坤, 操晶, 梅娜, 陈芬, 胡兴旺, 朱丹华

单位：1 浙江省农业科学院 作物与核技术利用研究所,杭州 310021; 2 长江大学 园艺园林学院,荆州 434025; 3 浙江师范大学 化学与生命科学学院,金华 321004

关键词：大豆转基因株系,GmWRKY70,高效热不对称交错PCR (Hi-TAIL PCR),T-DNA,

基金：国家转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08004002-010)

对转基因株系的PCR检测以及对T-DNA侧翼基因组序列的深入分析,可以充分了解转基因株系的特异性分子特征。本研究利用农杆菌(Agrobacterium)介导的大豆(Glycine max)子叶转化方法,获得了3个转GmWRKY70基因的大豆株系。本研究对除草剂抗性基因(bialaphos resistance, Bar)、目标基因GmWRKY70以及载体构建特异性片段进行PCR检测,利用高效热不对称交错PCR (high-efficient thermal asymmetric interlaced PCR, Hi-TAIL PCR)对T-DNA侧翼序列进行整合位点分析。结果表明,3个转GmWRKY70基因的大豆株系均为阳性株系。T-DNA在43 119 699~43 119 712 bp之间反向整合到大豆染色体Chr07中。T-DNA整合导致大豆染色体Chr07插入位点12 bp缺失。对于引入的T-DNA,发现左边界(left border, LB)的80 bp序列和右边界(right border, RB)的22 bp序列被截短。在导入的LB端和大豆基因组DNA的整合位点上发现了两个碱基对的微同源性,而RB未发现同源性。本研究设计新的整合位点特异性引物,并验证这种转化事件,为促进分子辅助选择在育种计划中的应用提供了资料基础。

来源：2020年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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