农业生物技术学报

作者：赵彩英, 李怡娜, 王琪, 甘泽, 张勇, 马友记, 张全伟, 赵兴绪

单位：1 甘肃农业大学 生命科学技术学院,兰州 730070;2 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;3 甘肃农业大学 动物科学技术学院,兰州 730070

关键词：激光激酶A (AURKA),5α,-还原酶1 (SRD5A1),双氢睾酮(DHT),支持细胞,性腺轴,

极光激酶A (aurora kinase A, AURKA)是细胞周期有丝分裂调节蛋白激酶之一,参与调控生殖细胞的发生和成熟。研究表明AURKA是雄激素受体(androgen receptor, AR)的靶基因,双氢睾酮(dihydrotestosterone, DHT)与胞内AR结合后促进精子成熟。因此,探究AURKA与DHT的作用机制对雄性动物生殖及相关疾病的研究有重要意义,但其具体作用及机制尚不完全清楚。本研究采集8周龄昆明雄性小鼠(Mus musculus)下丘脑、垂体和睾丸组织生殖轴器官组织,通过半定量PCR、免疫印迹(Western blot, WB)、苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)和免疫组化学染色(immunohistochemistry, IHC),探究AURKA在雄性小鼠性腺轴的表达规律及定位。设计AURKA-siRNA干扰序列,转染原代成年小鼠睾丸支持细胞,利用实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR, qRT-PCR)和WB检测转染24 h后,细胞AURKA和5α-还原酶1 (5α-reductase type 1, SRD5A1)基因和蛋白表达变化;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分析AURKA-siRNA干扰睾丸支持细胞对DHT含量的变化。结果表明,雄性小鼠性腺轴器官的组织中AURKA基因和蛋白均有表达,且睾丸组织中其表达量极显著高于下丘脑和垂体(P<0.01);睾丸支持细胞及精子中AURKA蛋白阳性反应最强;AURKA-siRNA干扰小鼠支持细胞24 h后,AURKA基因和蛋白的表达明显下调(P<0.05),而SRD5A1基因和蛋白表达显著上调(P<0.05)且DHT的含量显著增加(P<0.05)。说明AURKA负反馈调控SRD5A1表达促进DHT合成,本研究为雄性动物生殖过程中AURKA功能研究提供参考依据。

来源：2020年第9期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2020年第9期