农业生物技术学报

作者：刘莉, 何宛芹, 于翠, 吴建祥

单位：1 浙江经贸职业技术学院 应用工程系,杭州 310018; 2 浙江大学 生物技术研究所/国家水稻生物学重点实验室,杭州 310058; 3 上海海关 动植物与食品检验检疫技术中心,上海 200135

关键词：番茄黑环病毒(TBRV),单克隆抗体,斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue print-ELISA),

基金：国家重点研发计划项目(2019YFD1001800; YS2017YFGH000548; 2017YFD0201604)

番茄黑环病毒(Tomato black ring virus, TBRV)是严重危害多种草本及木本植物的口岸检疫性有害生物,加强口岸检验检疫是防止其入侵我国的关键。本研究以制备的抗TBRV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb)建立TBRV的血清学检测技术,旨在为该病毒的检测和口岸检验检疫提供技术支持。以提纯的TBRV粒子为免疫抗原,利用杂交瘤细胞技术制备4株能分泌抗TBRV单抗的杂交瘤细胞(10A8, 21A8, 21B8和8D3)及其单抗腹水。4株单抗腹水的间接酶联免疫吸附试验(indirect enzyme-linked immunosorbent assay, indirect-ELISA)效价达到10-7。Western blot分析单抗特异性表明,4株单抗均与感染植物中的TBRV外壳蛋白亚基发生特异性免疫反应,而不与健康植物组织发生反应。利用制备的单抗建立检测TBRV的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue print-ELISA) 2种血清学方法。建立的Dot-ELISA和Tissue print-ELISA均能特异性检测感病植物中的TBRV,而与感染烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus, TRSV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus, TSWV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus, ToMV)和番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)的植物和健康植物均呈阴性反应。以4株单抗建立的Dot-ELISA血清学方法检测TBRV病叶粗提液的灵敏度分别为1∶10 240、1∶10 240、1∶5 120和1∶5 120。上述实验结果表明,基于制备的4株单抗所建立的Dot-ELISA和Tissue print-ELISA血清学方法对于TBRV检测具有高度特异性和灵敏性,可以准确、有效地用于口岸TBRV检验检疫和田间植物TBRV的检测诊断。

来源：2020年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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