农业生物技术学报

作者：李国秀, 欧云文, 丁耀忠, 李茜, 代军飞, 刘磊, 张杰

单位：1 中国农业科学院 兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室/世界动物卫生组织(OIE)/国家口蹄疫参考实验室,兰州 730046; 2 开江县动物疫病预防控制中心,达州 636250; 3 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070

关键词：口蹄疫病毒(FMDV),南非2型(SAT2),VP1基因,可溶性表达,免疫原性,

基金：国家重点研发计划(2017YFD0501800; 2016YFD0501500); 甘肃省国际科技特派员项目(17JR7WA030); 中国农业科学院基本科研业务费; 四川省科技计划资助项目(2019JDRC0110; 2020JDRC0146)

南非2型口蹄疫(Foot-and-mouth disease serotypes Southern African territories 2, SAT2-FMD)是由南非2型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus serotypes Southern African territories 2, SAT2-FMDV)引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。当前全球贸易和人员往来频繁,SAT2-FMD传入中国的风险极高,这将严重威胁我国养殖业持续健康发展。为原核可溶性表达SAT2-FMDV (GenBank No. JX014256) VP1基因,探索VP1融合蛋白的免疫原性,本研究以序列优化的pUC57-His-SUMO-SAT2-VP1重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得993 bp目的序列,扩增产物克隆入pET32a (+)原核表达载体,构建pET32a-HisSUMO-VP1重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),诱导表达,亲和层析纯化。将纯化后HisSUMO-VP1融合蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,免疫Balb/C小鼠(Mus musculus),并对免疫小鼠血清抗体、脾淋巴细胞增殖和细胞因子水平进行测定。研究结果表明,HisSUMO-VP1融合蛋白实现原核可溶性表达,大小约为63 kD,且具有较好的反应原性;免疫小鼠实验结果发现,HisSUMO-VP1融合蛋白组的小鼠免疫血清抗体水平极显著高于HisSUMO蛋白组和PBS组(P<0.001),且抗体水平呈上升趋势;HisSUMO-VP1融合蛋白组小鼠脾脏淋巴细胞发生显著地增殖反应(P<0.001),细胞因子IFN-γ和IL-2水平显著高于PBS组(P<0.05)。本研究成功实现SAT2-FMDV-VP1基因的原核可溶性表达,表达的HisSUMO-VP1融合蛋白具有良好的免疫原性,为SAT2-FMDV疫苗及检测方法的研发提供数据支持。

来源：2020年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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