农业生物技术学报

作者：赵学亮, 王姝懿, 孙柯, 呼和巴特尔, 王文龙, 刘春霞

单位：1 内蒙古农业大学 兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特 010018; 2 西北农林科技大学 动物医学院,杨凌 712100; 3 内蒙古农业大学 生命科学学院,呼和浩特 010018

关键词：捻转血矛线虫,ABC (ATP-binding cassette)转运蛋白基因,生物信息学分析,原核表达,蛋白纯化,

基金：内蒙古自治区科技计划项目(201702074); 国家自然科学基金(31760731)

捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是绵羊(Ovis aries)、山羊(Capra hircus)等反刍动物重要的寄生虫之一,可造成养殖业的巨大经济损失。基于转录组研究,本课题组前期从捻转血矛线虫耐药虫株中鉴定获得耐药基因—ABC (ATP-binding cassette)转运蛋白基因(GenBank No. MT478136)。本研究拟分析ABC转运蛋白基因的生物信息学特征,建立ABC转运蛋白的可溶性诱导表达及纯化体系,为进一步探究ABC转运蛋白参与的耐药机制提供参考依据。首先利用在线软件对ABC进行蛋白质结构分析及抗原表位预测,结果显示,ABC分子式为C928H1502N270O265S7,属于不含跨膜区和信号肽的亲水性蛋白质,二级结构主要以延伸链为主;ABC转运蛋白的抗原性较高,含有较多的抗原表位。利用反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)扩增ABC转运蛋白基因,经酶切连接构建重组质粒pET30a(+)-ABC,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21后进行诱导表达条件的优化,以0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)于37 ℃诱导7 h可重组表达1 mg/mL ABC转运蛋白。本研究成功诱导表达并纯化了捻转血矛线虫重组ABC转运蛋白,可为深入开展其潜在耐药机制及免疫原性研究工作提供基础资料。

来源：2020年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2020年第10期