农业生物技术学报

作者：袁俊杰, 龙阳, 渭婷玉, 刘二龙, 冯黎霞, 刘思思, 陈文, 魏霜

单位：1 湛江海关,湛江 524022; 2 西宁海关,西宁 810000; 3 黄埔海关,广州510700; 4 广州海关,广州 510000; 5 华中农业大学 理学院,武汉 430074

关键词：大豆花叶病毒(SMV),菜豆荚斑驳病毒(BPMV),南方菜豆花叶病毒(SBMV),逆转录重组酶聚合酶常温扩增(RT-RPA),扩增内标(IAC),

基金：国家重点研发计划(2018YFC0809200); 海关总署科技计划项目(2020HK147; 2019HK052)

假阴性结果是影响核酸检测结果的主要因素之一。扩增内标(internal amplification control, IAC)在监控PCR过程中假阴性结果发挥着重要作用。为探索扩增内标在逆转录重组酶聚合酶常温扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification, RT-RPA)检测过程中的应用,解决RT-RPA检测过程中的假阴性问题,本研究通过复合引物法人工构建了扩增内标,并应用于大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus, SMV)、菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus, BPMV)及南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus, SBMV)三种大豆病毒RT-RPA检测过程。实验结果显示,所建立的方法能够实现目的基因特异性扩增的同时指示假阴性结果。灵敏度试验结果表明,当50 μL反应体系中扩增内标添加量为1.83×104 copies时,该体系对SMV及BPMV的检测灵敏度为0.05 ng;扩增内标添加量为1.83×103 copies时,该体系对SBMV的检测灵敏度为0.05 ng。利用该方法对10批实际大豆(Glycine max)样品进行检测,与对应反转录PCR (reverse transcription-PCR, RT-PCR)结果一致,表明其具有良好的适用性。研究结果表明本方法可有效指示3种病毒RT-RPA检测过程中的假阴性,提高检测结果的可信度,为相关产品的监管提供技术支持和参考依据。

来源：2020年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2020年第12期