农业生物技术学报

作者：曲婷婷, 张霄, 董飒, 刘贝贝, 李盼, 王耘, 张存政, 刘贤金

单位：1 南京农业大学 植物保护学院,南京 210095; 2 江苏省农业科学院 食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品量安全控制技术与标准重点实验室,南京 210014

关键词：Cry1Ab,Cry1Ac,scFv,DAS-ELISA,分子对接,

基金：国家自然科学基金项目(No. 31371778和No. 31301703)、江苏省自主创新项目(No. CX(14)5068)和江苏省自然科学基金(No. BK20150114)

为建立一种针对Cry1类毒素的经济高效的检测方法,本研究以杂交瘤细胞株2D10 cDNA为模板,通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR, SOE-PCR)技术构建单链抗体(single-chain variable fragment, scFv)基因,转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)表达并建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定(double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA)检测方法,通过分子对接模拟分析影响scFv与Cry1A类毒素结合的关键因素。结果成功构建了scFv基因,表达纯化出具有较高识别活性的scFv抗体(约28 kD),所建立的DAS-ELISA方法对Cry1Ab/Cry1Ac毒素的最低检测限(limits of determination, LOD)为20 ng/mL,分子对接结果显示,毒素的三维结构决定了其结合活性,氢键和疏水作用力在scFv与毒素结合过程中起重要作用。本研究利用基因工程抗体技术构建并表达获得了scFv抗体,建立了针对Cry1Ab/Cry1Ac毒素的双抗夹心ELISA检测方法,初步分析研究了scFv与Cry1Ac/Cry1Ab和Cry1Aa的识别差异机制,为进一步改造、研究开发新型广谱scFv提供了理论依据。

来源：2019年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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