农业生物技术学报

作者：俞雨阳, 林亚秋, 梁计峻, 王永, 朱江江

单位：1 西南民族大学 生命科学与技术学院,成都 610041;2 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室,成都 610041;3 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室,成都 610041

关键词：山羊,肉碱脂酰转移酶Ⅰ,肌肉亚型基因(CPT1B),基因克隆,肌内脂肪(IMF),基因表达,

基金：国家重点研发计划(No. 2018YFD0502002)、国家自然科学基金(No. 31601921和No. 31672395)、四川省科技支撑计划十三五育种攻关项目(No. 2016NYZ0045)和西南民族大学研究生创新型科研项目(No. CX2018SZ49)

肌内脂肪含量是动物育种的关键指标,利用分子生物学手段研究脂代谢调控机制是一项重要工作。本研究旨在克隆山羊(Capra hircus)肉碱脂酰转移酶Ⅰ肌肉亚型基因(carnitine palmityl transferase 1 B, CPT1B)序列,并利用qRT-PCR技术检测山羊不同组织和肌内前体脂肪细胞中CPT1B基因的表达模式,为深入探讨CPT1B基因在山羊脂肪酸代谢调控中的功能提供实验数据。首先选取1周岁的健康简州大耳羊(Jianzhou Big-eared goat) 7只,采集心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、股二头肌、臂三头肌、皮下脂肪和腹间脂肪并保存于液氮中,以索氏提取法检测背最长肌、股二头肌、臂三头肌的肌内脂肪含量;利用Trizol试剂提取上述保存的组织样品总RNA,利用反转录PCR方法克隆CPT1B序列并进行生物信息学分析;利用qRT-PCR方法检测CPT1B基因在山羊各组织的表达,分析其表达水平与肌内脂肪含量的相关性。结果显示,克隆得到山羊CPT1B基因序列2 619 bp (GenBank No. MH340532),包含完整的CDS区2 313 bp、5'UTR序列52 bp、3'UTR序列254 bp,编码771个氨基酸。各组织qRT-PCR结果显示,CPT1B在简州大耳羊心脏、背最长肌、股二头肌和臂三头肌有较高水平的基因表达,在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮下脂肪和腹间脂肪的表达水平较低;肌内前体脂肪细胞的检测结果显示,前体脂肪细胞分化期间的CPT1B表达量均极显著高于分化前和分化后(P<0.01);相关性分析显示,CPT1B基因表达量与各肌肉组织肌内脂肪含量均显著正相关(P<0.05)。综上所述,CPT1B可能在山羊肌内脂肪沉积过程中具有调控作用,上述结果为CPT1B基因在肉用山羊育种中的应用提供了基础资料。

来源：2019年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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