农业生物技术学报

作者：林裕胜, 李莎莎, 江锦秀, 张靖鹏, 游伟, 胡奇林

单位：福建省农业科学院 畜牧兽医研究所,福州350013

关键词：绵羊肺炎支原体,丝状支原体山羊亚种,TaqMan探针荧光定量PCR,

基金：国家重点研发计划项目(No.2016YFD0500906)、福建省公益科研院所专项(No.2018R1101014-17)、福建省农业科学院科技创新项目(No.PC2018-6)、福建省农业科学院科技创新团队PI项目(No.2016PI-7)和福建省农业科学院青年创新团队(No.STIT2017-3-10)

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Mo)和丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri, Mmc)是引起羊支原体性肺炎(M.pneumonia of sheep and goats, MPSG)的主要病原。为了快速鉴别引起MPSG的主要病原,建立一种可以同时检测Mo和Mmc的双重TaqMan探针荧光定量PCR (Real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)检测方法。根据Mo p113序列和Mmc MLC_1770 (hypothetical protein gene)序列,利用Beacon Designer 7.9结合NCBI Blast软件分析,分别设计出针对Mo和Mmc的特异性引物和探针。通过对引物浓度、探针浓度和退火温度等反应条件的优化,建立了双重TaqMan探针qRT-PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果表明,建立的双重TaqMan探针qRT-PCR的标准曲线相关系数R2分别为0.998和0.999,扩增效率分别为94.8%和97.0%;该方法对其他羊常见病原均无扩增信号,证明该方法具有良好的特异性;该方法对Mo和Mmc的最低检测限均为100 copies/μL,敏感性是常规PCR的100倍;组内和组间变异系数都低于2%,说明重复性好。应用该方法对福建省内收集的187例临床样品进行检测,结果显示,Mo的阳性率为47.6% (89/187),Mmc的阳性率为11.8% (22/187),两种病原体混合感染阳性率为10.2% (19/187)。以上数据结果表明,本研究建立的方法可用于临床上Mo和Mmc的准确、快速检测。本研究为Mo和Mmc的快速检测及流行病学提供了技术支撑。

来源：2019年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2019年第5期