农业生物技术学报

作者：李华伟, 刘中华, 张鸿, 许泳清, 李国良, 林赵淼, 许国春, 邱永祥, 纪荣昌, 罗文彬, 汤浩, 邱思鑫

单位：福建省农业科学院 作物研究所,福州 350013; 农业部南方薯类科学观测实验站,福州 350013

关键词：甘薯,甘薯卷叶病毒(SPLCV),环介导等温扩增技术(LAMP),SYBR Green Ⅰ,

基金：国家现代农业产业技术体系(CARS-10-B14);福建省科技重大专项-薯类(甘薯, 马铃薯)新品种选育及安全高效栽培技术研究(No. 2017NZ0002-2);福建省种业创新与产业化工程项目(No. fjzycxny2017005);福建省农业科学院创新团队项目(No. STIT2017-2-3)

甘薯卷叶病毒(Sweet potato leaf curl virus, SPLCV)是甘薯(Ipomoea batatas)生产上重要的病毒病之一,建立SPLCV快速检测方法,对该病的诊断及技术防控至关重要。本研究以甘薯卷叶病毒基因组的外壳蛋白基因(coat protein, cp)为靶序列,设计了一组环介导恒温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)特异性引物,以SYBR Green Ⅰ作检测指示剂,通过优化反应条件,建立了一种甘薯卷叶病毒的LAMP可视化快速检测方法,该方法在65 ℃的恒温条件下反应1 h完成检测。特异性检测结果表明,只有感染SPLCV的样品在指示剂的作用下呈现绿色,且扩增产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳出现梯形条带,而与感染其他甘薯DNA病毒、番茄黄花曲叶病毒(Tomato yellow mosaic leaf curl virus, TYLCV)、烟草曲叶病毒(Tobacco leaf curl virus, TLCV) 3种DNA病毒均无交叉反应,表明该方法具有较高的特异性;灵敏度检测结果表明,该方法的最低检测限为1 pg/μL基因组DNA,是普通PCR的10倍,说明该方法灵敏度较高。因此本研究建立的甘薯卷叶病毒环介导等温扩增技术具有扩增快速、特异性高、简便、不需要特殊仪器,肉眼可视化观察结果,适合田间甘薯卷叶病毒样品及基层部门的快速检测。

来源：2019年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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