农业生物技术学报

作者：韩小韦, 黄云娜, 牛毅男, 李学俊, 徐全乐, 陈鹏

单位：1 西北农林科技大学 生命科学学院,杨凌 712100;2 广州市从化区从化中学,广州 510900

关键词：内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(ENGase),N-糖基化,重组表达,酶学性质,

基金：国家自然科学基金(No. 30400282;No. 31171606);陕西省重点研发计划(No. 2017NY-033)

内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(Endo-β-N-acetylglucosaminidase, ENGase, EC3.2.1.96)是糖蛋白去糖基化重要的工具酶,其可以切割糖蛋白上N-连接的聚糖。本研究基于粪肠球菌(Enterococcus faecalis)基因组数据,通过PCR扩增ENGase基因endoE (endoglycosidase E),并以同源重组方式构建表达载体pET-28a-endoE,实现了EndoE在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 Star (DE3)中的高效表达,并对EndoE去糖化的催化特性等进行了较为系统的分析。研究结果显示,重组EndoE在大肠杆菌中以可溶形式表达,经钴离子螯合层析与阴离子交换层析可获得高纯度的目标蛋白,产量为45.6 mg/L。去糖基化活性分析表明,重组EndoE能去除天然及变性核糖核苷酸酶B (ribonuclease B, RNase B)、鸡卵白蛋白(ovalbumin, Ova)和免疫球蛋白G (immune globulin G, IgG) N-连接的糖基侧链。基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱证实了EndoE对RNase B N-连接糖链的水解活性。EndoE在20~50 ℃和pH 4.0~6.0的范围内均具有良好的水解活性,并对100 mmol/L二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol, DTT)、1 mol/L NaCl和2% Triton X-100具有耐受性。EndoE较已报道的粪肠球菌来源的ENGase具有更为广泛的底物作用范围,是蛋白质糖基化分析中有潜在应用价值的工具酶。

来源：2019年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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