农业生物技术学报

作者：谢实龙, 汪小福, 丁晨露, 祝旋, 汤婷, 马同富, 蔡健, 徐俊锋

单位：1阜阳师范学院,阜阳 236037;2浙江省农业科学院 浙江省植物有害生物防控重点实验室,杭州 310021

关键词：转基因大豆MON89788,重组酶聚合酶扩增(RPA),qRT-PCR,快速检测,转基因大豆,

基金：国家自然科学基金(No. 31772098)、2018年度安徽高校自然科学研究重点项目(No. KJ2018A0352)和2017年国家级大学生创新创业训练计划项目(No. 201710371034)

MON89788是较早被批准商业化种植的转基因大豆(Glycine max)品种,种植范围广,产品流通量大。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, RPA),针对MON89788的转化体特异性序列设计了引物和探针,利用正反向引物筛选的方法获得了最佳引物组合,并对反应的温度、引物和探针的浓度进行了优化选择。结果表明,RPA在29.5~43.1 ℃范围内都能扩增,对温度的容忍度较大,高浓度的探针会影响实时荧光RPA的扩增效率。同时对实时荧光RPA检测体系的特异性、灵敏度和适用性等进行测试,最终建立了MON89788实时荧光RPA检测方法。该检测方法特异性强,对MON89788的绝对检测限(absolute limit of detection, aLOD)可达到40拷贝,相对检测限(relative limit of detection, rLOD)为0.05%,对实际样品的检测在39 ℃,10 min内完成,是实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测时间的0.07~0.13倍。该恒温、快速的检测方法为转基因成分的快速检测提供了新的技术支持,有望用于转基因成分的现场快速检测。

来源：2019年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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