农业生物技术学报

作者：王雯, 包世俊, 邢小勇, 胡荣斌, 丁小琴, 伏小平, 薛慧文

单位：甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070

关键词：小反刍兽疫病毒(PPRV),N基因,原核表达,免疫原性,

基金：国家自然科学基金(No.31360620)

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants, PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus, PPRV)引起的一种急性传染病,严重危害世界养羊业的健康发展。2013年以来,国内多地出现小反刍兽疫疫情,给我国养羊业造成了重大经济损失。本研究根据小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株N基因核苷酸序列(GenBank No. HQ197753)设计特异性引物,扩增获得PPRV武威分离株N基因全序列(GenBank No. KY429031),在序列分析的基础上,构建该基因的原核表达载体pET-PPRV-N,并将其转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3)后诱导表达。纯化表达产物,免疫Balb/C小鼠(Mus musculus)制备多克隆抗体,进而应用ELISA、Western blot和免疫荧光检测(immunological fluorescence assay, IFA)对PPRV N蛋白的免疫原性进行分析。结果表明,PPRV武威分离株属于Ⅳ系,且其N基因全序列与国内24株PPRV分离株及2016蒙古株的同源性高达99.0 %;重组蛋白His-PPRV-N在大肠杆菌Rosetta (DE3)中成功获得表达,其相对分子质量约为57.8 kD,且主要以可溶性形式存在;ELISA、Western blot及IFA结果显示,重组蛋白小鼠多抗ELISA效价可达1∶64 000,可与PPRV疫苗株或武威分离株的N蛋白特异性结合,且制备的多抗显示出对PPRV明显的中和作用,表明了重组蛋白良好的免疫原性。本研究结果为PPRV检测方法的建立和N蛋白生物学功能的进一步研究提供了基础资料。

来源：2019年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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