农业生物技术学报

作者：许涛, 潘阳阳, 何翃闳, 李谷月, 陈平, 温泽星, 崔燕, 余四九

单位：甘肃农业大学 动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心,兰州 730070

关键词：肿瘤坏死因子α (TNF-α),牦牛,体外受精,胚胎发育,

基金：国家自然科学基金(No.31472244和No.31702311)、甘肃农业大学盛彤笙科技创新基金(No.GSAU-STS-1614)和甘肃省青年科技基金计划(No.17JR5RA141)

肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor α, TNF-α)是一种促炎性辅助性T细胞(helper T cell, Th1)因子,能参与调节哺乳动物的排卵、胚胎发育和附植等生殖过程。本研究旨在通过检测TNF-α在牦牛(Bos grunniens)卵母细胞成熟及早期体外受精(in vitro fertilization, IVF)胚胎发育过程中的表达,探讨TNF-α在卵母细胞成熟与体外受精胚胎发育过程中的作用。本研究收集牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs),在体外进行成熟培养并受精,获得体外受精胚胎,并评估植入前各时期胚胎的发育能力。采用qRT-PCR、间接免疫荧光染色、Western blot等方法从基因和蛋白水平检测TNF-α在未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和植入前各时期胚胎中的表达与分布。结果表明：(1) 2~4细胞胚胎、5~8细胞胚胎和桑椹胚的发育率分别为(61.59±0.31)%、(53.76±0.22)%和(26.88±0.32)%,囊胚率为(16.12±0.23)%;(2) qRT-PCR结果表明,未成熟COCs、成熟COCs、桑椹胚和囊胚均可检测到TNF-α基因的表达,其相对表达水平由高到低依次为成熟COCs、未成熟COCs、囊胚和桑椹胚,2~4细胞胚胎和5~8细胞胚胎无表达;(3) Western blot结果显示,TNF-α蛋白相对表达水平由高到低依次为成熟COCs、未成熟COCs、囊胚和桑椹胚,2~4细胞胚胎和5~8细胞胚胎无表达;免疫荧光染色结果显示,TNF-α蛋白主要分布在COCs、桑椹胚和囊胚的细胞质中,在细胞核中表达较弱。本研究表明,TNF-α可能在牦牛卵母细胞的成熟、受精和胚胎发育过程中发挥作用,也可能参与囊胚的细胞凋亡和附植过程。本研究为揭示TNF-α在牦牛生殖过程中的作用机制提供了理论依据。

来源：2019年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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