农业生物技术学报

作者：潘坛, 吕明, 罗军, 李聪

单位：西北农林科技大学 动物科技学院/陕西省农业分子生物学重点实验室 杨凌 712100

关键词：西农萨能奶山羊,TRIB3 (tribbles pseudokinase 3 gene),基因克隆,生物信息学分析,RNA干扰,

基金：中国博士后科学基金特别资助项目(No.2018T111110)、中国博士后科学基金面上资助项目(No.2017M613230)和西北农林科技大学博士科研启动基金(No.2452016203)

TRIB3 (tribbles pseudokinase 3)是一类丝氨酸/苏氨酸激酶样蛋白,常作为脂质代谢的负调控因子参与胰岛素信号转导途径,调控机体的脂质代谢。本研究旨在获得西农萨能奶山羊(Capra hircus)TRIB3基因序列并阐明其结构,通过RNAi技术干扰TRIB3基因表达,初步探究其对奶山羊乳腺上皮细胞脂质代谢的影响。以西农萨能奶山羊乳腺组织为实验材料,利用RT-PCR方法对TRIB3基因进行克隆,并进行生物信息学分析,研究结果表明,奶山羊TRIB3基因完整CDS区为1 074 bp (GenBank No. MK158243),编码357个氨基酸;蛋白分子量为39.6 ku,等电点为7.8,为不稳定蛋白;TRIB3存在36个磷酸化位点,无信号肽和跨膜螺旋结构;同源性分析显示,西农萨能奶山羊与绵羊(Ovis aries)、牛(Bos taurus)、小鼠(Mus musculus) TRIB3氨基酸序列同源性分别为99%、96%、71%,与绵羊亲缘关系最近。组织表达分析显示,TRIB3基因在奶山羊乳腺组织中显著高表达,其次是脂肪组织。将设计合成的siRNA转染乳腺上皮细胞,结果显示,干扰TRIB3基因表达可显著上调脂质代谢相关基因—过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor γ, PPARG)和二酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase, DGAT1)的mRNA水平。上述结果提示TRIB3可能作为负调节因子参与乳腺上皮细胞的脂质代谢。本研究为后续开展TRIB3调控羊奶乳脂代谢的分子机理提供了基础资料。

来源：2019年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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