农业生物技术学报

作者：黄幸, 严爱芬, 邓廷贤, 欧阳宏佳, 刘连, 冯娟, 朱向星, 聂庆华, 唐冬生, 张细权

单位：1 华南农业大学 动物科学学院,广州510000;2 佛山科学技术学院 广东省基因编辑工程技术研究中心,佛山528000

关键词：基因打靶,锌指核酸酶(ZFN),Fat1,转基因,

基金：国家科技重大专项(No.2009ZX08010-023B)、广东省重点领域研发计划(No.2018B020203003)和佛山市科技创新项目计划(No.2017AG100111)

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans) Fat1基因翻译产物是ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,哺乳动物因为缺少这个基因,不能将ω-6多不饱和脂肪酸转化为ω-3多不饱和脂肪酸,因此只能通过饮食获得ω-3多不饱和脂肪酸,以保证ω-6/ω-3的平衡,满足机体的健康所需。为获得整合了Fat1基因且能稳定表达的转基因猪(Sus scrofa),本实验采用锌指核酸酶(zinc finger nuclease, ZFN)介导的多位点打靶技术从细胞水平上开展了转基因技术的研究。首先构建了陆川猪Fat1基因打靶载体pCAGGS-DS2-eGFP-Fat1-DS1,并设计和构建了两个靶向陆川猪rDNA基因中内转录间隔区1 (internal transcribed spacer-1, ITS-1)序列的锌指核酸酶真核表达载体pcDNA3.1-NLS-ZFN-R和pcDNA3.1-NLS-ZFN-L。然后从猪的肾脏中成功分离出原代成纤维细胞(primary kidney fibroblast, PKF),通过脂质体共转染将Fat1基因打靶载体和锌指核酸酶载体导入细胞,转染细胞7 d后,提取细胞基因组DNA,PCR检测外源基因整合情况,结果表明Fat1基因成功整合到陆川猪PKF细胞基因组中,本研究为进一步获得转基因猪提供了一定的理论依据。

来源：2019年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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