农业生物技术学报

作者：陈健楠, 王琪, 王媛媛, 吕琛, 赵彩英, 张勇, 马友记, 张全伟, 赵兴绪

单位：1 甘肃农业大学 生命科学技术学院,兰州 730070; 2 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070; 3 甘肃农业大学 动物科学技术学院,兰州 730070

关键词：牦牛,隐花色素1基因(CRY1),生殖轴,基因克隆,表达分布,

基金：国家高技术研究发展计划(863)项目(No. 2013AA102505-3)和甘肃农业大学学科建设基金(No. GSAU-XKJS-2018—160)

隐花色素1 (cryptochrome 1, CRY1)基因是哺乳动物生物钟基因之一,其表达蛋白既是光受体又是生物钟的组成部分,经体液和神经途径送达效应器,调节生理、生化和节律行为。本研究采集牦牛(Bos grunniens)的下丘脑、垂体、松果体及睾丸组织,通过反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)技术对CRY1编码区序列进行克隆和序列分析,通过荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR, qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色技术分析CRY1在成年雄性牦牛生殖轴系及不同年龄段(30日龄, 2, 4和6岁龄)雄性牦牛睾丸中的表达规律。结果显示,CRY1基因CDS全长为1 712 bp,ORF为1 257 bp (GenBank No. MN460656),共编码418个氨基酸残基,无跨膜结构区,编码的蛋白属可溶性蛋白;组织表达与分布结果发现,CRY1 mRNA和蛋白在雄性牦牛下丘脑、垂体、睾丸及松果体组织中均有表达,在松果体组织中的表达水平极显著高于其他组织(P<0.01);免疫组织化学染色结果显示,在下丘脑室旁核细胞、垂体细胞、睾丸各级生精细胞、松果体细胞和神经胶质细胞上均有阳性表达;不同年龄段睾丸组织中表达结果发现,CRY1 mRNA和蛋白在30日龄睾丸中的表达量最低,随着年龄的增长,表达量逐渐增高。研究结果表明,CRY1在动物进化中比较保守,在雄性牦牛性腺轴和不同年龄牦牛睾丸中均有表达,推测其可能在牦牛生殖过程中起着重要作用。上述结果为牦牛生物节律基因CRY1的生物学功能及其在牦牛生殖生理调控的相关研究提供依据。

来源：2019年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2019年第10期