农业生物技术学报

作者：王若冰, 朱雨凝, 丰艳妮, 李华涛, 丛霞, 曹荣峰, 姜忠玲, 田文儒

单位：青岛农业大学 动物医学院 繁殖障碍性疾病研究所,青岛 266109

关键词：葛根素,猪近端肾小管细胞(LLC-PK1),热应激,凋亡,热休克蛋白(HSPs),

基金：国家自然科学基金(No. 31772815; No. 31572590)和山东省重点研发计划(No. 2018GNC110005)

葛根素对动物具有解热作用,但其作用机制尚不清楚。本研究目的在于明确葛根素是否对受热应激猪(Sus scrofa)近端肾小管细胞(pig kidney proximal tubular cells, LLC-PK1)具有保护作用及其潜在机制。本研究将LLC-PK1细胞分为对照(C)组,热应激(HS, 42 ℃)组,葛根素(Pue, 10 µmol/L)组和热应激加葛根素(HS+Pue)组。分别用CCK-8和流式细胞术检测细胞生存率和凋亡率,使用qRT-PCR和Western blot分别检测B细胞淋巴瘤-2 (B-cell lymphoma, Bcl),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、细胞色素c (cytochrome c, Cyto c)和细胞凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor, AIF) mRNA和蛋白表达水平,用相应试剂盒检测半胱天冬酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, caspase) Caspase-9和Caspase-3活性及热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs) HSP72和HSP90的含量。结果发现,葛根素抑制LLC-PK1线粒体Cyto c的释放和AIF mRNA的表达,并降低热应激条件下LLC-PK1细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性。同时,热应激加葛根素组细胞中Bcl与Bax的比率以及HSP72的表达增加,HSP90的表达降低。上述结果表明,葛根素能降低热应激诱导的LLC-PK1细胞损伤,其机制是通过抑制线粒体凋亡通路的激活,上调细胞HSP72的表达来实现的。本研究揭示了葛根素抑制热应激诱导的LLC-PK1细胞损伤的部分机制,为临床上使用葛根素作为抗热应激的有效药物提供了基础资料。

来源：2019年第11期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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