农业生物技术学报

作者：廖娟, 高小龙, 王小龙, 柳亚琳, 张海杰, 任善会, 杨毅, 包世俊, 韩宇

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070; 2 青海大学 农牧学院,西宁810003; 3 中国农业科学院 兰州兽医研究所,兰州 730070; 4 榆林学院 现代农学院,榆林 719000; 5 乐山师范学院 生命科学学院,乐山 614000

关键词：山羊副流感病毒3型(CPIV3),NP蛋白,生物信息学分析,原核表达,多克隆抗体制备,

基金：陕西省自然科学基金青年项目(2025JC-YBQN-291); 榆林学院高层次人才科研启动基金(2025GK25)

山羊副流感病毒3型(Caprine parainfluenza virus type 3, CPIV3)属副黏病毒科呼吸道病毒属,是山羊(Capra hircus)和绵羊(Ovis aries)呼吸道疾病的重要病原之一,严重影响我国羊养殖业的健康发展。为了制备CPIV3核衣壳蛋白(nucleocapsid protein, NP)的多克隆抗体,为CPIV3致病机制和疫病防控研究提供生物学材料,本研究基于CPIV3/SX/2024毒株基因序列,对其B细胞表位进行预测分析,利用PCR扩增NP全长基因,构建原核表达重组质粒并利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)进行目的蛋白诱导表达,蛋白经过纯化后免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)制备多克隆抗体,并对其生物学特性进行分析。结果表明,CPIV3 NP蛋白存在多个潜在B细胞表位,目的基因片段大小约为1 625 bp,与预期结果相符;成功构建原核表达质粒,命名为pET28a-CPIV3-NP;该重组质粒经IPTG诱导后成功表达目的蛋白,分子量大小约为60 kD,目的蛋白主要在包涵体中表达,最优表达条件为37 ℃,浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导8 h。目的蛋白免疫小鼠后制备的多克隆抗体能够与CPIV3发生特异性反应,抗体效价达1∶512 000,具有良好的抗原免疫原性。本研究为CPIV3的致病机制和诊断防控技术研究提供重要的实验材料。

来源：2026年第2期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2026年第2期