农业生物技术学报

作者：张楠, 韩浩章, 张丽华, 赵荣, 李素华, 王芳

单位：宿迁学院 生物与材料工程学院,宿迁 223800

关键词：乙醇脱氢酶(ADH)基因,上游调控蛋白筛选与验证,酵母单杂交,双荧光素酶报告基因技术,猴樟,

基金：江苏省自然科学基金(BK20231362); 宿迁市自然科学基金(K202316)

呼吸代谢与植物耐受盐碱胁迫密切相关,乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase, ADH)是植物进行无氧呼吸的关键酶,在盐碱胁迫下上调表达,对植物耐受盐碱胁迫起到了重要作用。为揭示CbADH基因参与猴樟(Cinnamomum bodinieri)耐受盐碱胁迫的分子机制,本研究以耐碱猴樟品系为材料,克隆CbADH基因启动子序列,通过酵母单杂交技术筛选出CbADH基因上游调控因子,采用双荧光素报告基因技术验证上游调控蛋白对CbADH基因启动子的功能。结果显示,获得的CbADH基因启动子片段长度为1 996 bp;CbADH基因启动子片段中包含光响应调控元件、脱落酸(abscisic acid, ABA)响应元件、分生组织表达响应元件、茉莉酸甲酯(methyl jasmonic acid, MeJA)响应调控元件、GA响应元件、压力响应元件、水杨酸(salicylic acid, SA)响应元件、愈伤组织响应元件、转录因子MYB结合位点、转录因子bHLH结合位点、转录因子WRKY结合位点。通过酵母单杂交技术共获得17个成功注释的上游调控因子,主要包括蛋白激酶超家族、氨基酸转运体、脱落酸调节休眠的中间体1 (mediator of ABA-regulated dormancy 1, MARDⅠ)锌指结构蛋白、拟南芥同源域-亮氨酸拉链(Arabidopsis thaliana homeobox 6, ATHB-6)蛋白、三糖磷酸异构酶蛋白、胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein, LEA)、酪氨酸/多巴胺脱羧酶、甘露醇脱氢酶蛋白、ATP合酶和细胞色素B5家族蛋白。双荧光素酶报告显示,CbATHB6蛋白在植物体内正向激活了CbADH基因启动子活性。以上结果表明,转录因子CbATHB6能够与CbADH基因启动子序列结合,通过调控CbADH基因的表达响应盐碱胁迫。本研究对解析猴樟呼吸代谢响应盐碱胁迫的分子机制提供依据。

来源：2026年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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