农业生物技术学报

作者：陈芳芳, 徐婉旖, 张俊, 周徐庆, 李帅, 刘雪兰, 李锦春

单位：1 安徽农业大学 动物医学院/人兽共患病实验室安徽省重点实验室,合肥 230036; 2 山东农业大学 动物医学院,泰安 271017

关键词：Vti1b,Ii,共定位,结合,沉默,高表达,

基金：安徽省自然科学基金(2108085MC116)

恒定链(invariant chain, Ii)作为抗原加工递呈的重要免疫调节分子,在调控主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)Ⅰ/Ⅱ类分子的组装运输、内吞体分选及抗原肽加载过程中发挥关键作用;Vti1b (vesicle transport through interaction with t-SNAREs 1B)作为内吞体膜融合的关键调控因子,通过介导内吞体-溶酶体融合及自噬体成熟参与抗原加工递呈通路,但是二者关系尚不清楚。本研究以小鼠(Mus musculus) Vti1b和Ii为研究对象,旨在明确二者的亚细胞定位和蛋白质间的相互关系;同时探究Vti1b基因在细胞内低表达和高表达状态下对Ii及其MHC相关分子表达水平的影响。首先对小鼠不同细胞类型及生长时期细胞中的Vti1b分子进行克隆,并进行氨基酸序列比对;随后将Vti1b以及Ii基因的P31、P41异构体分别克隆至真核表达载体,运用激光共聚焦技术,解析Vti1b与Ii在Raw264.7细胞中的共定位特性,同时借助免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)、蛋白拉下实验(pull-down)和Western blot技术,探究二者在真核细胞内的蛋白质相互作用关系;最后,通过siRNA介导的基因沉默及Vti1b真核重组质粒转染过表达实验,采用qPCR技术,检测Raw264.7细胞中Vti1b的转录水平变化,以及该基因在低表达和过表达状态下Ii及MHC相关基因的转录水平。结果表明,Vti1b氨基酸序列在小鼠不同细胞及不同生长期仅有1~2个氨基酸的差异;Vti1b与Ii蛋白存在结合关系且在小鼠细胞Raw264.7内共定位于晚期内吞体;当Vti1b基因转录水平显著下调至正常对照组的42% (P<0.05)时,Ii、MHCⅠα和MHCⅡβ基因转录水平也随之显著降低,分别降至对照组的45% (P<0.01),48% (P<0.01)和47% (P<0.05)。Vti1b基因过表达至40.88倍,MHCⅡβ基因转录水平显著上调,达到对照组的154% (P<0.01),而Ii和MHCIα基因转录水平与对照组相比无显著差异。Vti1b转录水平与Ii及其MHC相关分子基因转录水平相关,尤其表现为Vti1b转录水平降低可导致Ii及其MHC相关基因转录水平下调。研究结果明确了Vti1b与Ii在晚期内吞体的共定位及蛋白互作,证实Vti1b对Ii及其MHC相关基因表达具有调控作用。本研究为解析其细胞生物学功能及免疫学机制提供了重要依据。

来源：2026年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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