农业生物技术学报

作者：张凡, 敖慧娟, 胡嘉琦, 李睿, 马维斌, 王军, 马思恒, 蓝雯琳, 谈笑, 乔自林, 杨琨

单位：1 西北民族大学 细胞基质疫苗关键技术与产业化教育部工程研究中心/甘肃省动物细胞技术创新中心/生物工程与技术国家民委重点实验室,兰州 730030; 2 西北民族大学 生命科学与工程学院,兰州 730030; 3 甘肃省生物工程材料工程研究中心,兰州 730030

关键词：双皮质素样激酶1 (DCLK1),MDCK细胞,细胞功能,成瘤性,疫苗安全,

基金：甘肃省青年人才项目(2025QNGR63); 甘肃省高等学校教师创新基金(2023B-055); 中央高校基本科研业务费专项资金(31920250051)

MDCK (Madin-Darby Canine Kidney)细胞作为流感疫苗生产的重要细胞基质,其潜在的成瘤性仍是制约疫苗安全性的关键因素。双皮质素样激酶1 (double cortin-like kinase 1, DCLK1)作为肿瘤干细胞标志物,在多种恶性肿瘤中高表达并参与肿瘤恶性进展,但其在MDCK细胞成瘤性中的作用尚不明确。本课题组通过蛋白组学在高成瘤性和非成瘤性MDCK细胞中筛选出差异表达蛋白DCLK1,本研究通过慢病毒载体介导的基因转染技术,建立了DCLK1稳定敲低和过表达的MDCK细胞系。通过CCK-8、划痕、Transwell迁移实验、克隆形成实验评估了DCLK1对MDCK细胞多项生物学特性的影响。结果表明,DCLK1敲低对MDCK细胞形态和增殖能力无显著影响,但可显著降低细胞的迁移、侵袭和低密度增殖能力,DCLK1过表达则增强这些能力。进一步研究发现,DCLK1敲低下调肿瘤相关因子尿斑蛋白3A (uroplakin 3A, UPK3A)表达,上调肝配蛋白B型受体2 (ephrin type-B receptor 2, EphB2)和共济失调蛋白1 (ataxin-1, ATXN1)表达,而DCLK1过表达对这几种因子的表达无显著影响。此外,构建不同成瘤性MDCK细胞BALB/c裸鼠(Mus musculus)模型,对肝脏组织进行染色分析,发现血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)与血管细胞粘附分子(vascular cell adhesion molecule 1, VCAM-1)的表达与MDCK细胞成瘤性未呈现明确相关性,提示其成瘤性可能不依赖这2种因子的调控。结果显示,DCLK1可能通过调控下游靶基因的表达参与MDCK细胞致瘤过程。本研究为深入理解MDCK细胞成瘤性机制提供了重要线索,也为后续降低MDCK细胞成瘤性的研究提供了潜在的靶基因,对提高MDCK细胞疫苗安全性具有重要意义。

来源：2026年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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